Как очистить и регенерировать колонку после загрязнения?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: Когда хроматографическая колонка загрязнена, ее хроматографическое поведение будет несколько отличаться от поведения незагрязненной колонки. Загрязненные колонки могут вызвать проблемы с обратным давлением. Загрязненную обращенно-фазовую колонку ......

Когда хроматографическая колонка загрязнена, ее хроматографическое поведение будет несколько отличаться от поведения незагрязненной колонки. Загрязненные колонки могут вызвать проблемы с обратным давлением. Загрязненную обращенно-фазовую колонку необходимо очистить и регенерировать, чтобы восстановить исходные рабочие условия.
Ключом к регенерации загрязненной ВЭЖХ-колонки является знание природы загрязнения и поиск подходящего растворителя для его удаления. Если загрязнение вызвано накоплением сильно удерживаемых веществ во время повторных инъекций, простые шаги по удалению этих загрязнений часто могут восстановить хроматографические характеристики. Иногда после многих операций хроматографическую колонку промывают 90-100%-ным растворителем Б (более сильным растворителем в двухрастворительной обращенно-фазовой системе) в количестве 20 объемов для удаления загрязнений. Например, для остаточных липидов в колонке можно использовать неводные растворители, такие как метанол, ацетонитрил и тетрагидрофуран.

Вообще говоря, все методы очистки имеют схожие формы. Используемые растворители увеличиваются с увеличением силы растворителя. Часто последний растворитель является очень гидрофобным (например, этилацетат или даже углеводород) и может использоваться для растворения неполярных веществ, таких как липиды и масла. Мы должны гарантировать, что каждый растворитель в ряду растворителей можно смешивать со следующим растворителем.
В конце процесса очистки необходимо вернуться к исходной системе растворителей с помощью смешиваемого растворителя средней концентрации. Например, изопропанол является очень хорошим растворителем в качестве промежуточной стадии, поскольку он смешивается с н-гексаном или дихлорметаном, а также с растворителями в водной фазе. Однако вязкость изопропанола очень высока, и необходимо обеспечить низкую скорость потока, чтобы избежать чрезмерного давления насоса. При промывке хроматографической колонки промывочная жидкость напрямую соединяется с бутылью для отходов с выходного конца хроматографической колонки и не может проходить через ячейку обнаружения, чтобы избежать загрязнения ячейки обнаружения.
В хроматографической колонке с обращенной фазой не используется буферный раствор, для регенерации используйте следующую серию растворителей:
100% метанол → 100% ацетонитрил → 75% ацетонитрил-25% изопропанол → 100% изопропанол → 100% метиленхлорид → 100% н-гексан → 100% метиленхлорид → 100% изопропанол → 100% ацетонитрил.
В колонке для хроматографии с обращенной фазой используется буферный раствор, для регенерации используйте следующие серии растворителей:
вода → ацетонитрил → хлороформ (или изопропанол) → ацетонитрил → вода.