Ответы на часто задаваемые вопросы о клеточных культурах

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2022-07-14 16:15:00 Thursday

Summary: 1. Если я получу флакон с замороженными клетками, могу ли я хранить его непосредственно в жидком азоте? Во многих случаях клетки, перевозимые на сухом льду (-80°C), можно вернуть в жидкий азот, а затем быстро разморозить. Однако такое лечение......

1. Если я получу флакон с замороженными клетками, могу ли я хранить его непосредственно в жидком азоте?
Во многих случаях клетки, перевозимые на сухом льду (-80°C), можно вернуть в жидкий азот, а затем быстро разморозить. Однако такое лечение может снизить жизнеспособность клеток. Для некоторых чувствительных клеточных линий это может затруднить восстановление клеток. Считается, что это явление связано с изменением структуры внутриклеточных кристаллов льда при изменении температуры. Поэтому рекомендуется размораживать и культивировать клетки как можно скорее после получения. Лучше всего сократить время хранения при -80°C, предпочтительно использовать эту температуру только для транспортировки.

2. Почему клетки следует хранить в газовой фазе, а не в жидкой фазе в резервуаре с жидким азотом?
Клетки хранятся в фазе жидкого азота для облегчения восстановления. В жидкой фазе жидкого азота, если криопробирка не запечатана должным образом или протекает, клетки находятся в непосредственном контакте с жидким азотом, что повлияет на жизнеспособность клеток после оттаивания.

3. Как менять среду для взвешивания клеток?
Клетки в суспензии можно выращивать, просто добавляя свежую среду (если позволяет место) или отделяя клетки от старой среды центрифугированием (100 x g в течение 5 мин) с последующим ресуспендированием осевших клеток в свежей среде. Однако для большинства суспензионных клеточных линий лучшим подходом является простое добавление среды. Любой метод требует обновления среды до того, как клетки достигнут максимальной плотности насыщения. Плотность насыщения клеток составляет от 3 х 10 5 до 2 х 10 6 в зависимости от клеточной линии и условий культивирования (покой или возбуждение, уровень оксигенации и т.д.).

Клетки должны быть разбавлены до более низких концентраций клеток, чтобы обеспечить достаточное восстановление питательных веществ для поддержания логарифмического роста клеток. Если просто заменить среду без снижения плотности клеток, клетки быстро истощат среду и погибнут. Если клетки разбавлены ниже их минимальной плотности, они вступят в лаг-фазу, будут расти очень медленно или погибнут. Каждая суспензионная клеточная линия имеет различную плотность насыщения и интервал пассажей, поэтому ежедневный подсчет клеток является лучшим способом мониторинга суспензионной клеточной линии.